1、植物細(xì)胞性
植物細(xì)胞性(totipotency)是組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。一個生活的植物細(xì)胞,只要有完整的膜系統(tǒng)和細(xì)胞核,它就會有一整套發(fā)育成一個完整植株的遺傳基礎(chǔ),在一個適當(dāng)?shù)臈l件下可以通過分裂、分化再一個完整植株,這就是所謂的細(xì)胞性。但是在自然狀態(tài)下,由于細(xì)胞在植物體內(nèi)所處位置及生理條件的不同,它的分化受到各方面的調(diào)控,致使其所具有的遺傳信息不能全部表達(dá)出來,所以只能形成某種特化細(xì)胞,構(gòu)成植物體的一種組織或一個器官的一部分。由此可以說明條件是十分重要的,或者說是關(guān)鍵的,只要條件合適,細(xì)胞潛在的遺傳能力就會表現(xiàn)出來。植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)就是以細(xì)胞性作為理論依據(jù),用人為的方法創(chuàng)造出一個適合于生長的理想條件,使細(xì)胞的性得以發(fā)揮。
從理論上講,只要是一個生活的細(xì)胞,都有再生出一個完整植株的潛力,但實際情況并非如此簡單。就目前所知,細(xì)胞的再生潛力與其分化程度呈負(fù)相關(guān),就是說細(xì)胞分化程度越高其再生能力越低,但也有人認(rèn)為細(xì)胞的再生能力與其分化程度無關(guān),只是人們現(xiàn)在還沒能*掌握細(xì)胞分化的機制。雖然還沒有*從理論上揭示其原因,但事實是越老的細(xì)胞,其基因的表達(dá)就越受到嚴(yán)格的制約,或者說喪失功能或不表現(xiàn)功能的基因越多,所以應(yīng)盡量選取幼嫩的植物組織作為培養(yǎng)的實驗材料。同時,還應(yīng)該考慮到,一定的基因型或外植體的再生能力并不是一成不變的,在不同培養(yǎng)條件下,同一基因型或外植體的表現(xiàn)不同,高度分化的細(xì)胞或組織只要條件合適,也有產(chǎn)生再生植株的可能,這種可能性能否變成現(xiàn)實,還有待于人們繼續(xù)努力。
2、細(xì)胞分化、脫分化與再分化
(cell differentiation,didifferentiation and ridifferentiation)
一粒成熟的種子含有一個小小的胚,也可以叫做胚胎。構(gòu)成胚胎的所有細(xì)胞幾乎都保持著未分化的狀態(tài)和旺盛的細(xì)胞分裂能力,其細(xì)胞質(zhì)濃稠,細(xì)胞核較大,細(xì)胞與細(xì)胞之間沒有很大差異,這些細(xì)胞都可以叫做胚性細(xì)胞,或叫分生性細(xì)胞或未分化細(xì)胞。在適宜的條件下,隨著種子的萌發(fā),構(gòu)成胚胎的所有細(xì)胞即開始分裂活動,增加細(xì)胞數(shù)目。隨著時間的進行細(xì)胞的命運發(fā)生不同變化,形態(tài)和功能也發(fā)生變化,有的形成了葉子的細(xì)胞,有的形成了根的細(xì)胞,有的形成莖的細(xì)胞,有的仍保持分裂能力,有的則逐漸失去分裂能力,細(xì)胞的這種在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生*性(不可逆轉(zhuǎn)性)適度變化的過程叫做分化。分化主要是由細(xì)胞內(nèi)的基因決定的,也就是說分化是基因在時間和空間兩個方面差次表達(dá)的結(jié)果。分化的結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞分裂能力的喪失,伴隨的是細(xì)胞的分化、成熟與組織的形成,是植物根、莖、葉、花、果實和種子的形成,是一個成熟植物體的出現(xiàn)。在正常的自然狀態(tài)下,這些已經(jīng)分化的細(xì)胞不會再恢復(fù)分裂能力重新開始細(xì)胞分裂,直到植物體死亡為止。
當(dāng)把一個已經(jīng)失去了分裂能力,處于分化成熟和分裂靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞置于特定的增殖培養(yǎng)基上時,它首先發(fā)生的變化是回復(fù)到分生性狀態(tài),這一狀態(tài)包括由溶酶體的活動而將失去功能的細(xì)胞質(zhì)組分降解,并產(chǎn)生新的細(xì)胞質(zhì)組分(即細(xì)胞器的破壞與重建),同時細(xì)胞內(nèi)酶的種類與活性發(fā)生改變,蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞代謝過程也發(fā)生改變,zui后引起基因表達(dá)的改變,細(xì)胞的性質(zhì)和狀態(tài)發(fā)生了扭轉(zhuǎn),可以說是返老還童。由失去分裂能力的細(xì)胞回復(fù)到分生性狀態(tài)并進行分裂,形成無分化的細(xì)胞團即愈傷組織的現(xiàn)象(或者說是過程)稱為“脫分化”(dedifferentiation)。經(jīng)過脫分化的細(xì)胞如果條件合適,就可以長久保持旺盛的分裂狀態(tài)而不發(fā)生分化。由無分化的愈傷組織的細(xì)胞再轉(zhuǎn)變成為具有一定結(jié)構(gòu),執(zhí)行一定生理功能的細(xì)胞團和組織,構(gòu)成一個完整的植物體或植物器官的現(xiàn)象(或過程),叫做“再分化”(redifferentiation)。一個已分化細(xì)胞要表達(dá)出其性,就要經(jīng)過脫分化和再分化的過程,這就是植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)所要達(dá)到的目的。設(shè)計培養(yǎng)基和創(chuàng)造合適培養(yǎng)條件的主要原則就是如何促使植物組織和細(xì)胞完成脫分化和再分化,培養(yǎng)的主要工作就是設(shè)計和篩選培養(yǎng)基,探討和建立合適的培養(yǎng)條件。
植物激素在調(diào)節(jié)細(xì)胞脫分化和再分化中起到主要作用。植物對激素的反應(yīng)十分敏感,培養(yǎng)基中生長素類和細(xì)胞分裂素類的種類、相對比例和量都能直接影響到細(xì)胞脫分化和再分化的過程,組培中常常是通過調(diào)節(jié)激素的種類、濃度和相對比例來達(dá)到調(diào)節(jié)脫分化和再分化的目的。
3、器官發(fā)生和胚狀體發(fā)生(organogenesis and embryogensis)
培養(yǎng)的植物組織與細(xì)胞再經(jīng)過脫分化和再分化再生出新的植物體過程中,特別是再分化時,可經(jīng)過兩條途徑,一是由愈傷組織的部分細(xì)胞先分化產(chǎn)生芽(或根),再在另一種培養(yǎng)基上產(chǎn)生根(或芽),形成一個完整的植株,因為芽和根都是植物體的器官,所以這一過程叫器官發(fā)生途徑。另一個是在愈傷組織中產(chǎn)生出一些與種子中的胚相似的結(jié)構(gòu),即同時形成一個有苗端和根端的兩極性結(jié)構(gòu),然后再在另一種培養(yǎng)基上同時發(fā)展成帶根苗,由于這一過程與種子中胚的形成和種子萌發(fā)時形成幼苗的過程相似,所以叫做胚狀體發(fā)生或無性胚胎發(fā)生。組培條件下,植物再生是走器官發(fā)生途徑還是走胚狀體途徑,隨植物不同而不同,也隨培養(yǎng)基的不同而變化,有時甚至同一種植物在同一條件下,即存在體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑,也存在器官發(fā)生發(fā)生途徑,這都是自然現(xiàn)象,是正常的,只是兩種發(fā)育途徑的頻率隨著基因型不同和培養(yǎng)條件的改變而差異顯著。