二核苷酸（CpG）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：
本試劑盒用于測定樣本中二核苷酸（CpG）的含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本中二核苷酸（CpG）水平。用純化的二核苷酸（CpG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入二核苷酸（CpG），和HRP標(biāo)記的二核苷酸（CpG）抗原，使它們競爭結(jié)合，經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的二核苷酸（CpG）的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中二核苷酸（CpG）的含量。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品S1（2400ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S2（1200ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 標(biāo)準(zhǔn)品S3（600ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
4 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S4（300ng/L ） | 0.5ml×1瓶 |
5 | 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S5（150ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
6 | 終止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 說明書 | 1份 |
7 | 樣品稀釋液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2張 |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本處理：（1）水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查
（2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
檢測范圍：
50ng/L -2800ng/L
規(guī)格：
96份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月
