ELISA實驗終于做完了,結(jié)果被計算難倒了,作為科研人絕不認(rèn)輸,那恒遠(yuǎn)小編就給大家分享下,如何用 Origin 計算 ELISA 實驗結(jié)果。作為 ELISA 實驗的后步,檢測結(jié)果的計算對整個實驗十分重要,不小心就半途而廢了......
以夾心法為例:
1.ELISA 的樣本通常要設(shè)置 1~2 個復(fù)孔進行檢測,分別求出標(biāo)準(zhǔn)品、實驗組樣本的吸光度的平均值。單個樣本的檢測值不應(yīng)超出平均值的 20%;
2. 樣本的 OD(吸光度)平均值要減去標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 0 時的 OD 平均值;
3. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在對數(shù)坐標(biāo)圖上擬合四參數(shù)的邏輯函數(shù)曲線(X 軸上為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,Y 軸為對應(yīng)的OD值)。推薦使用 origin 軟件。詳細(xì)步驟如下:
第Ⅰ步:輸入 OD 值和標(biāo)準(zhǔn)品濃度
第Ⅱ步:選擇擬合曲線類型
選中輸入的數(shù)值框,按如下操作依次點擊選項。
第Ⅲ步:勾選「find specific X/Y」
完成上述操作后,點擊 Fit 按鍵,擬合曲線和相關(guān)信息將自動(如第四步所示)
第Ⅳ步:查看標(biāo)準(zhǔn)曲線信息(如參數(shù)值,R-Square 等)
第Ⅴ步:設(shè)置坐標(biāo)軸類型為對數(shù)
雙擊第四步中的擬合曲線圖,對其進行編輯。雙擊 X 軸、Y 軸設(shè)置坐標(biāo)類型為「Log10」。
第Ⅵ步:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度
選擇第四個工作表(Fit NLF Find X from Y1),在左列輸入樣本的 OD 值,對應(yīng)的濃度將在右列自動。
如果樣本的 OD 值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限,請在實驗適當(dāng)稀釋樣本以獲得精確結(jié)果。在分析數(shù)據(jù)時,樣本實際濃度應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的濃度乘以稀釋倍數(shù)。