五味子水提物對反復(fù)腦缺血再灌注小鼠學(xué)習(xí)記憶及腦能量代謝的影響
馬素好 李鳳麗 張家梁 ( 鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州 450064)
〔摘 要〕 目的 探討五味子水提物對反復(fù)腦缺血再灌注小鼠學(xué)習(xí)記憶及腦能量代謝的影響。方法 將小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、尼莫地平組、五味子水堤物大、中、小劑量組，后四組分別灌服尼莫地平混懸液、五味子水提物大、中、小劑量?？瞻捉M和模型組給予同體積生理鹽水，每日 1 次，連續(xù)給藥 10 d，采用雙側(cè)頸總動脈夾閉，建立反復(fù)腦缺血再灌注模型。術(shù)后24 h 用避暗法進(jìn)行行為學(xué)檢測，觀察并記錄小鼠*進(jìn)入暗室的潛伏期及 5 min 內(nèi)進(jìn)入暗室遭電擊的次數(shù)。行為學(xué)檢測完畢小鼠斷頭取腦，測乳酸( LD) 、乳酸脫氫酶( LDH) 、乙酰膽堿酯酶( AchE) 活力以及 ATP 酶活力。結(jié)果 與模型組相比，尼莫地平組可以顯著增加小鼠的潛伏期、顯著降低小鼠錯誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( 均 P ＜ 0. 01) ，五味子水提物大劑量組可以明顯增加小鼠潛伏期并顯著降低小鼠錯誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) 。與模型組相比，尼莫地平組、五味子水提物中、小劑量組均可顯著減少小鼠 LD 的含量( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物大、中劑量組均可以顯著升高小鼠 LDH 的活力( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物組小劑量均可顯著升高小鼠 AchE 活力( P ＜ 0. 01) ; 與模型組相比，尼莫地平組、五味子水提物大劑量組可以顯著升高小鼠 Na + -K + -ATP 酶活力( P ＜
0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物大、中劑量組均能顯著升高小鼠 Ca2 + -ATP 酶活力( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物大劑量組能夠顯著升高小鼠 Ca2 + -Mg2 + -ATP 酶活力( P ＜ 0. 01) 。結(jié)論 五味子水提物可以改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力并提高腦組織功能。
〔關(guān)鍵詞〕 五味子水提物; 反復(fù)腦缺血再灌注; 學(xué)習(xí)記憶; 腦能量代謝
〔中圖分類號〕 Ｒ285 〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕 A 〔文章編號〕 1005-9202( 2016) 21-5243-02; doi: 10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 21. 012
對于腦血管疾病的治療，目前西醫(yī)僅以改善腦部血循環(huán)、 擴(kuò)血管增加缺血區(qū)血流量、消除腦水腫、降低血液黏滯性、防止血栓延續(xù)等對癥治療為主〔1〕，但大多西藥都伴隨著嚴(yán)重不良反應(yīng)，制約了藥物療效的發(fā)揮和疾病的康復(fù)。中藥在對抗腦缺血發(fā)作方面有著自己的優(yōu)勢。五味子性酸、甘、溫，具有收斂、固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效。前期人們重在對五味子的藥理藥性方面的研究。近年來，有人對五味子藥理活性也進(jìn)行了研究〔2〕，本實驗研究五味子水提物對反復(fù)腦缺血再灌注致記憶障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶以及能量代謝的影響。
1 材料與方法
1. 1 實驗動物 昆明種小鼠，體重 19 ～ 22 g，雌雄各半，由河北醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，合格證號: 1011023。
1. 2 試劑 五味子為木蘭科植物五味子( Turcz) 的干燥成熟果實，又稱北五味子〔3〕，該藥購自河南皖西制藥有限公司，并經(jīng)專家鑒定為正品。五味子 100 g，經(jīng)水煎煮兩次，合并兩次濾液，濃縮至 200 ml( 1 ml 含生藥 0. 5 g) 。尼莫地平片，生產(chǎn)廠家: 天津市中央藥業(yè)有限公司，規(guī)格 30 mg / 片，批號 0903108。小鼠條件反射箱，淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司。乙酰膽堿酯酶( AChE) 測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有 限公司，批 號20111012; 乳酸脫氫酶( LDH) 測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批號 20110911; 乳酸( LD) 測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批號 20111009; ATP 酶測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批號 20111101。
1. 3 實驗方法 將 72 只昆明種小鼠隨機(jī)分成 6 組( 雌雄分籠飼養(yǎng)) ，分別為: 空白組、模型組、尼莫地平組、五味子水提物大、中、小劑量組。除空白組和模型組外，給尼莫地平組小鼠灌服
基金項目: 鄭州市科技創(chuàng)新團(tuán)隊資助項目( No. 21PCXTD520)
第yi作者: 馬素好( 1969-) ，女，在職碩士，主治醫(yī)師，主要從事心腦血管內(nèi)科研究。
尼莫地平混懸液( 0. 01 g / kg、0. 2 ml /10 g) ，給五味子各組分別灌服五味 子 水 提 物 大、中、小 劑 量 ( 0. 6 g / kg、0. 3 g / kg、
0. 15 g / kg、0. 2 ml /10 g) ?？瞻捉M和模型組給予同體積生理鹽水，每日 1 次，連續(xù)給藥 10 d，進(jìn)行手術(shù)。用 10% 的水合氯醛進(jìn)行麻醉，將上述小鼠仰位固定在鼠板上，行頸部切口，分離雙側(cè)頸總動脈，穿線備用。然后用動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈阻斷血流，10 min之后，松開動脈夾，使血液再灌注 10 min，反復(fù)進(jìn)行 2次。手術(shù)之后的創(chuàng)口應(yīng)以碘伏消毒，后縫合傷口。術(shù)后24 h，上述各組小鼠均進(jìn)行行為學(xué)測定( 避暗法)〔4〕，將小鼠頭部背向洞口放入明室，然后通以 25 V 的電壓，同時啟動計時器，小鼠一進(jìn)入立即受到電擊，而計時器則同時停止計時。取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遇到電擊所需的時間，此即潛伏期。24 h 后重新測驗，記錄潛伏期和 5 min 內(nèi)的電擊次數(shù)。將完成行為學(xué)測定的小鼠斷頭取腦，其中一半稱重， 加 9 倍的生理鹽水制成 10% 的腦勻漿，以備測 LD、LDH、AchE 活力以及 ATP 酶活力，上述測定方法均按各自的試劑盒說明書進(jìn)行。
1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS19. 0 軟件進(jìn)行單因素方差分析。
2 結(jié) 果
2. 1 五味子水提物對小鼠行為學(xué)的影響( 避暗法) 與空白組相比，模型組可顯著降低小鼠的潛伏期、顯著升高小鼠的錯誤 反應(yīng)次數(shù)( 均 P ＜ 0. 01) ，說明該實驗造模成功。與模型組相比，尼莫地平組可以顯著增加小鼠的潛伏期、顯著降低小鼠錯 誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( 均 P ＜ 0. 01) ，五味子水提物大劑量組可以明顯增加小鼠潛伏期，顯著降低小鼠錯誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) 。見表 1。
2. 2 五味子水提物對小鼠腦組織中 LD、LDH 及 AChE 活力的影響 與空白組相比，模型組能夠顯著提高小鼠 LD 的含量、顯著減少小鼠 LDH 及 AchE 的活力( P ＜ 0. 01) ，說明本實驗造模成功。與模型組相比，尼莫地平組、五味子水提物中、小劑量組
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