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Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。

在實(shí)驗(yàn)中，樣品的制備也是非常重要的，操作不好可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，到底該怎么制備樣品呢？接下來(lái)小編就帶你看看ELISA樣品制備的方法吧！

1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清液

①將培養(yǎng)基移至離心管， 4℃， 1,500 rpm 離心 10 分鐘；
②立即進(jìn)行上清液的分裝（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

2.細(xì)胞提取物

①將組織培養(yǎng)板放置在冰上；
②吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷PBS 輕輕洗滌細(xì)胞一次；
③吸出 PBS ，加入100 mm 培養(yǎng)板加入0.5ml*提取緩沖液；
④收集細(xì)胞至在傾斜板中，然后移至經(jīng)過(guò)預(yù)冷的離心管中；
⑤短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘；
⑥在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘，沉淀不溶性?xún)?nèi)容物；
⑦將上清液（這里是指可溶性細(xì)胞提取物）分裝至預(yù)冷的離心管中，并于 -80℃ 保存，盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

3.條件培養(yǎng)基

①將細(xì)胞接種到*（含血清）生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，使細(xì)胞增殖達(dá)到一定的融合率；
②棄去培養(yǎng)基，數(shù)毫升預(yù)熱PBS 小心洗滌，重復(fù)洗滌步驟；
③棄去PBS 洗滌液并小心加入無(wú)血清培養(yǎng)基；
④孵育 1-2 天；
⑤將培養(yǎng)基移至離心管， 4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘；
⑥立即分裝上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

4.乳汁

①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；
②分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

5.血漿

①將全血收集到含抗凝劑的管中，例如 BD 抗凝真空采血管或添加 0.1M 檸檬酸鈉至 1/10 終體積；
②4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘；
③立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

6.尿液

①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；
②等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少凍融循環(huán)次數(shù)。

7.唾液

①收集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；
②立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

8.血清

①將全血收集到未經(jīng)處理的測(cè)試管中，或者到不含抗凝劑的管中，如 BD 血清用真空采血管；
②在室溫下連續(xù)孵育 20 分鐘；
③4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘；
④立即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

9.組織提取物

①用干凈的工具解剖組織，best好在冰上、盡快進(jìn)行，以防止被蛋白酶降解；
②將組織置于圓底的微量離心管中，并浸入液氮中進(jìn)行“速凍”，將樣品保存在 -80℃ 下以便后續(xù)使用或放置在冰上進(jìn)行直接勻漿；
③對(duì)于約 5 mg 的組織片，可向管中添加約 300 μl *提取緩沖液（查看細(xì)胞/組織提取緩沖液配方），然后用電動(dòng)勻漿器勻漿；
④清洗刀片兩次，每次清洗使用 300μl *提取緩沖液，然后在 4℃ 下維持恒定攪拌 2 小時(shí)（例如置于冷室中的回旋振蕩器上）；
⑤4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘。置于冰上，將上清液（這里是指可溶的蛋白質(zhì)提取物）分裝至新、預(yù)冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

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